HeLa hücrelerinde Sisplatinin MTOR, AKT, CCND1 ve STAT3 mRNA ifadesi üzerine etkileri

Abstract

Giriş: Serviks kanseri, kadınlarda gözlenen malign tümörler arasında en yaygın görülen ve kadınlarda kanser sonucu gözlenen ölümler arasında ikinci sırada bulunan önemli bir hastalıktır. Platin temelli bir bileşik olan sisplatin (CDDP) bu kanserin tedavisinde sıklıkla kullanılan kemoterapötik ajanlardan birisidir ve sarkomlar ile solid tümörlerin tedavisinde etkili bir şekilde kullanılmaktadır. CDDP DNA’ya çapraz bağlanıp replikasyonu engelleyerek hasar oluşumuna neden olur. Bunun sonucunda da apoptotik yolaklar aktive olur ve hücre ölümü gerçekleşir. Çalışmamızda CDDP’nin, mTOR, AKT, Siklin D1 (CCND1) ve STAT3 genlerinin mRNA ifadesindeki etkisini serviks kanseri hücre hattı HeLa üzerinde araştırmayı amaçladık. Yöntem: Bu çalışmada HeLa hücrelerine 24 ve 48 saat süre ile değişen konsantrasyonlarda sisplatin uygulandı. Hücre canlılığı XTT yöntemi ile belirlendi. Ayrıca, seçilen CDDP dozlarının uygulanmasından sonra, mTOR, AKT, CCND1 ve STAT-3 genlerinin mRNA ifadesi qPCR yöntemi ile araştırıldı. Bulgular: CDDP’nin IC50 değerinin 24 saat için yaklaşık 60 uM, 48 saat için ise yaklaşık 8 uM olduğunu belirledik. Ayrıca, analizi yapılan genlerin ifadelerinin sadece 24 saat uygulamadan sonra azaldığını bulduk. Diğer taraftan, 48 saat CDDP uygulamasının mRNA ifadesi açısından istatistiksel açıdan anlamlı bir farkılılığa neden olmadığını gösterdik. Sonuç: Sonuç olarak, CDDP uygulamasından sonra, uygulama süresi açısından değişen, farklı mRNA ifade örüntülerinin olduğunu bulduk. Konvensiyonel kemoterapötik olan CDDP’nin hücre sağkalım yolakları üzerindeki etkisinin ortaya çıkarılması açısından çalışmamız literatüre katkı sağlamaktadır.

Objective: Cervical cancer is one of the most tumors seen in womans and second leading cause of cancer death in women. Cisplatin (CDDP), a platin based compound, is the most important chemotherapeutic agent and effectively used for the treatment of sarcomas and solid tumors. It binds to the DNA with crosslinks and leads inhibition of replication, causing DNA damage. As a result of this action, apoptotic pathways are induced and cell death occurs. In our study, we aimed to investigate the effect of CDDP on relative mRNA expression of mTOR, AKT, Cyclin D1 (CCND1) ve STAT3 on cervical cancer cell line. Method: In this study, HeLa cells were treated with different concentrations of CDDP at 24 and 48 hours. Cell viability was determined by XTT method. Moreover, after treatment with selected doses of cisplatin, quantitative mRNA expression of mTOR, AKT, CCND1 and STAT-3 genes was analyzed using Real-Time PCR. Results: IC50 concentration of CDDP was found to be about 60 µM for 24h and 8 µM for 48h treatment. Moreover, all analyzed genes’ expression was shown to diminish only after 24 h treatment. On the other hand, no statistically significant change was found after 48 h cisplatin exposure with respect to quantitative mRNA expression. Conclusion: In summary, different mRNA expression pattern was found after CDDP treatment regarding to exposure time. Our study has been contributed the literature in terms of detecting the effect of conventional chemotherapeutic CDDP on cell survival pathways.